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        實驗室薄層層析板制作及使用經驗

        于配制CMC-Na:

        1.先將稱好的CMC加入所需水量的8/10,讓其充分溶漲后,在加熱煮沸,然后將剩余水慢慢加入.這樣在煮沸過程中不易形成顆粒,煮沸時間短.

        2.CMC溶液的濃度0.3-0.7%比較合適,實際操作中0.4%-0.5%最為實用,濃度高了將來顯色時如果有加熱過程稍不小心板子容易發黑,濃度低了鋪出來的板子不結實,輕輕一碰就掉渣,不好保存,而且點樣時會很緊張,容易出洞.

        3.0.5%CMC-Na與水浴溶漲至充分攪拌溶漲,如果不好溶漲,可在溶脹前加幾滴乙醇,比較好溶,但是盡量不加,因為加入乙醇后使CMC-Na的粘合性降低。充分溶脹后,用脫脂棉墊到布氏漏斗上抽濾。封口冷藏待用。

        4.(1)CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兌,否則,幾天以后就會變綠,起霉。注意放置時間太長的CMC-Na溶液可能會發黃,而且可能有霉菌出現,絕對不能再使用。
        (2)如果有抽濾裝置你可以直接把CMC-Na溶液濾過,就可以不必等它沉淀再取上清液了(嘿嘿,我是急性子),還有兩個好處一是節省CMC-Na溶液,二是倒濾過的CMC-Na溶液的時候不必擔心會把下層的不溶物倒出來了。┯袀辦法過濾CMC溶液,在布氏漏斗上平鋪薄薄一層脫脂棉,千萬保證每個小孔都沒漏掉哦!用蒸餾水潤濕脫脂棉,啟動真空泵,抽緊后就可以放心大膽的倒CMC溶液了,保證濾過的溶液澄清透明,而且長時間放置不沉淀。

        5.CMC-Na是一種高分子材料,而高分子材料的溶解必然都會有一個溶脹,溶解的過程,所以配制的時候,應該將稱好的CMC-Na少量的撒在水的表面,讓其自然沉降,注意要散開平鋪,這樣能夠充分浸潤,使其溶脹,之后可以置于水浴鍋內加熱溶解,當然如果你不是很急著用的話也完全可以,直接用水泡著放那,估計十天半月的也可以用了.

        6.CMC-Na的配制,大家也說了很多,我只是想說一下在CMC-Na的溶解過程中,可以使用可進行加熱操作的磁力攪拌器,大概攪拌5小時,應該可得到滿意的效果。而且這樣就可以使CMC-Na溶解,并且溶液更澄清。CMC-Na后處理,很多人說是過濾,或者抽濾,我覺得可能速度很慢,而且又容易浪費。我的做法是離心,5000rpm離心20min。倒出上清液,(非常清,也同時消除了過濾過程中可能發生的污染。)更難能可貴的是,我可以收集下面沒有充分溶解的CMC-Na。繼續加到水中,還可以配制!何樂而不為呢?

        7.鋪CMC-Na的薄層板,先將CMC-Na溶解完全,可將溶解成所需濃度加熱后超聲處理,再抽濾,可很快得到上清液

        關于薄層板的要求:

        1.載板要求平滑清潔,沒有劃痕,在使用前可用洗滌液或肥皂水洗滌,再用水沖洗干凈,涼干。

        2. 怎么樣的玻璃算是干凈:就是用洗潔精浸泡也好,用酸浸泡也好,當你覺得洗干凈的時候,拿在手上立起來,如果發現水不是呈股流下,而是呈瀑布狀態流下,那么說明你的玻璃已經洗干凈了。其實真正洗干凈的玻璃,很快就可以晾干的。

        3.鋪制薄層板要求玻璃板干凈、整潔、不掛水珠的。建議用燒堿溶液浸泡。如果還解決不了那就只好放棄這塊玻璃板了。

        關于研磨及鋪板要求:

        1. 取薄層層析硅膠重量與CMC-Na的體積比為1:4的比例(該比例能使硅膠板鋪出的效果較好不至于掉渣也不至于板太硬)充分混合碾磨,至拿起碾錘能看到混合液與碾錘有一定的粘連。即好。薄層板一定要光滑無油污,取一定量的溶液置板上,用薄棒引導使其鋪滿板面,一手托起硅膠板另一手在下輕輕敲,轉動板子均勻的敲勻。

        2. 硅膠的研磨,當然是一個方向了,可以適量的加入一定量的無水乙醇或丙酮來消泡,可以適當攪拌后放在干凈容器內超聲,效果都是不錯的。手工鋪硅膠的用量一般10*20的約3-4克,硅膠和CMC-Na的用量一般是1:2.8-3,具體根據要鋪板子的厚度和CMC-Na的濃度決定。

        3.依據薄層板使用需要,將適量研好的吸附劑倒到薄層板上,先用小錘將吸附劑蕩勻,傾斜層析板,使吸附劑流至層析板一側,待吸附劑蓄積一定量后,再反向傾斜層析板,使吸附劑回流;然后是另外兩個方向,重復上述操作,后輕顛幾下薄層板即可。

        4. 將載玻片置于平臺上,用藥匙舀取糊狀硅膠,均勻地鋪在載玻片表面。鋪板時,可以順著板中間倒,也可以順著某個邊緣倒,也可以用玻璃棒引著溶液平鋪在玻璃板上,倒時也要注意不要引入小氣泡。如有需要,可以雙手10個指頭托住玻璃板,有節奏的顛簸,使得糊狀硅膠分布勻稱。尤其是載板的四個角,容易高出玻璃板其他部位,所以要格外注意。顛好的板,表面看上去要光滑平整,沒有氣孔。薄層板鋪好后一定要放置在平的臺面上,否則難保證板面硅膠的厚度均勻。

        5. 鋪制好的薄層板先讓其稍干后,即看不出有明顯的水印,放入烘箱內用50度以下的溫度并開鼓風干燥30分鐘,再升溫干燥至干,注意升溫過快在使用的過程中有可能發生起層的現象不利于分離。

        6. 10g吸附劑加入3滴95%乙醇以驅趕氣泡;

        關于展開劑:

        分離的樣品酸性比較大,一般在展開劑中加酸

        1.加甲酸是因為該樣品是酸性的,加酸的量和該物質的酸性成正比關系,加水可能是因為你的樣品是苷類的用酸水做一下緩沖,目的就是讓斑點圓滑,不脫尾,展距良好。

        2.飽和也非常重要,邊緣效應很嚴重的不妨用下端浸在展開劑中的濾紙貼在展開缸的內壁,這樣飽和效果會好一些

        3.1)在層析缸口涂適量凡士林,增加密封性;
        2)以展開劑邊緣效應的大小,確定展開劑平衡時間的長短,一般平衡時間在30分鐘即可。

        4.有機溶劑的極性,甲醇>氯仿,因此在氯仿:甲醇:氨水(10:1:0.6)這個展開劑中,如果極性略大,可適當降低甲醇比例;如極性太小,可適當增大甲醇比例。
        氯仿:甲醇:氨水 10:1:0.6 和20:2:1.2 極性肯定是相同的,這有問題嗎?
        另外還有一個問題,這個展開劑中,甲醇用量較小,而甲醇又易揮發,容易產生邊緣效應,要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封。

        5.不同的展開系統意思是其中至少應該有一種溶劑不同(最好是不同分類組的溶劑)。而不是比例不同;蛘呤褂貌煌墓潭ㄏ。

        關于展開:

        1.TLC中樣品拖尾現象是什么原因?該如何解決?
        2.TLC中樣品跑成幾乎為一條線,斑點沒有清晰的分離,想請教一下這是什么原因造成的?一般情況下該如何解決?

        原因基本相同:
        a、對于一些具有酸堿性的化學成分,在溶液中部分電離,事實上展開時存在分子、離子兩種狀態,以中性的有機試劑展開必然會出現兩種層析行為,造成脫尾甚至是一條線。
        b、展開劑選擇不當
        c、點樣量過大,樣品超載

        解決辦法:
          a、在展開劑中加幾滴甲酸或冰醋酸;
          b、展開時以氨水飽和
          c、減少點樣量
          d、參考文獻,調整展開劑種類、比例

        關于顯色:

        1.在工作中研究過用硫酸乙醇顯色作定量分析的品種,但凡加了CMC的板都易烘糊,尤其是溫度高于100度時,后改用不加CMC輔的水板來作,就不會有烘糊現象,故也可推論CMC易于與硫酸起糊化反應。

        2. “0.5%的板加熱時間長了就會黑”,是在層析完,顯色后吧,我也遇到過同樣的情況,這只有嚴格控制加熱顯色的時間。

        這個問題應該是這樣回答:但凡加了CMC的板都易烘糊,尤其是溫度高于100度時,若改用不加CMC輔的水板來作,就不會有烘糊現象,但不加CMC輔的板又太軟,點樣時容易點出洞,有個好辦法是將CMC的濃度調至0.1%,這樣就不易烘黑的。

        3.關于薄層板加熱變黑的問題,其實很容易解決:當噴完顯色劑后不用在放烘箱里烘了,可以用電吹風在板子背面吹吹就能顯色了。實驗室里一般都采用此法,簡便、快捷。如果一非想使用烘箱烘的話,一定要用帶玻璃窗的,當看到顯色了就取出,不然不好控制顯色時間,時間過長,CMC容易碳化變黑

        4。各位樓主真是經驗豐富,我鋪的0.5%的板加熱時間長了就會黑,有什么好著嗎?

        根據我的經驗,薄層版變黑與CMC-Na的濃度過大有關,如果你留意的話,你會發現,當顯色劑中有濃硫酸時,加熱時間稍長就會變黑(其他顯色劑是沒事的),我老師說這是因為濃硫酸把CMC-Na炭化了,其實[color=blue=這種情況你只要適當降低CMC-Na的濃度[/color]就可以了,當然如果不加CMC-Na的話容易把板弄破。一般我都是顯色后用電吹風吹的,要均勻吹,電吹風離板的距離要遠些,防止部分會黑。
        另還要注意顯色劑,如果顯色劑中含有硫酸,加熱時間一定要掌握好,不可太長。

        關于裂板:

        1.板子會裂口,一則可能是因為硅膠的比例太大,二則可能是,板子要在常溫下晾干后,再在烘箱中活化。如果鋪完不久就在較高溫度下,裂口的幾率就比較高的。

        2.“晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了,有什么方法可以避免板子炸裂! 
        你的板沒有完全干透,表面看是干了,但是最中間的沒有干,所以你直接放入105度的烘箱烘,當然會炸裂了,所以應該先用低溫大約40度左右烘30分鐘左右,再用105度活化,就可以解決這個問題了。

        3.關于活化出現裂板、爆板的問題;罨瘯r不要等到溫度達到100度,而是設好溫度后就將板子放在干燥箱,然后再通電加熱,達到最高溫度后停留5分鐘左右即可。這樣水分是慢慢由內而外散發,而不是由外向內散發,避免了表面成膜,里面還在散發水氣。

        關于點樣:

        1.點樣我本人沒有什么技巧,就是在點樣時食指放在點樣管的上端,當點樣管的下端與硅膠板接觸的瞬間輕輕松動上端的食指,溶液自然從點樣管出來,迅速提起點樣管,就這樣反復操作點出的斑點既小又均勻。但要提出樣品溶液不能太濃,濃度太大,點下的樣品不能被硅膠很好的吸收,不利于分離。

        2.關于點樣,我上學的時候,老師用比較便宜的進樣器(大約10幾塊錢吧,10μl即可),將針尖打磨圓滑,老師好像是用銼一點一點銼的,這樣點樣的時候樣品溶液不容易沿針尖上行(甲醇溶液都這樣),并且針尖不會刺破已經鋪好的薄層板。

        3. 要磨平微量進樣器的針尖,簡單的方法就是,在展缸的蓋子上輕磨(當然是靠近中間部分),就很快能解決問題,且很平滑。


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